3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞作為一種常用的脂肪細(xì)胞模型，在肥胖研究、代謝相關(guān)疾病探索以及藥物篩選等諸多領(lǐng)域有著至關(guān)重要的作用。其提取方法主要包含以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：
首先，細(xì)胞復(fù)蘇環(huán)節(jié)不容忽視。從液氮中取出凍存的3T3-L1小鼠前脂肪細(xì)胞株，需迅速將其置于37℃水浴鍋中，輕柔晃動(dòng)使其快速解凍，這一過程中要確保凍存管的密封性，防止水浴中的水進(jìn)入管內(nèi)污染細(xì)胞，待細(xì)胞懸液全融化后，用酒精棉球擦拭凍存管外壁進(jìn)行消毒，隨后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的培養(yǎng)基進(jìn)行離心，去除凍存液中的二甲基亞砜等成分對(duì)細(xì)胞的潛在損害，離心后棄上清，獲得相對(duì)純凈的細(xì)胞沉淀，再將其重懸于新鮮的培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)進(jìn)行初步培養(yǎng)。
接著，便是細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化過程。將復(fù)蘇后的3T3-L1細(xì)胞放置于含有合適血清（如胎牛血清）、葡萄糖以及抗生素的DMEM培養(yǎng)基中，在37℃、5%二氧化碳的細(xì)胞培養(yǎng)箱里進(jìn)行培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度達(dá)到一定程度（通常約100%）時(shí)，便開始進(jìn)行誘導(dǎo)分化操作。通過更換特定的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，一般包含胰島素以及IBMX等成分，持續(xù)作用數(shù)天，促使前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化。在這個(gè)過程中，要密切觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，原本呈成纖維細(xì)胞樣的前脂肪細(xì)胞會(huì)逐漸變圓，胞漿內(nèi)開始出現(xiàn)脂滴，這是脂肪細(xì)胞分化的典型特征。
最后，當(dāng)細(xì)胞完成分化后，若需要獲取較為純凈的脂肪細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，可采用消化結(jié)合離心的方法進(jìn)一步純化。先用適量的消化液處理分化后的細(xì)胞，使細(xì)胞間的連接蛋白被分解，細(xì)胞相互分離，形成單個(gè)細(xì)胞懸液，然后加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，再次離心，經(jīng)過多次清洗和離心后，就能得到純度較高的
3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞，可用于后續(xù)的脂肪代謝相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)、基因表達(dá)分析以及藥物作用效果評(píng)估等實(shí)驗(yàn)研究，為深入探索脂肪細(xì)胞相關(guān)的生理和病理機(jī)制提供可靠的細(xì)胞模型基礎(chǔ)。
